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新手必看:如何自己手動(dòng)填裝鎳Ni柱

點(diǎn)擊次數(shù):5078更新時(shí)間:2022-02-21
  鎳Ni柱具有很高的穩(wěn)定性和兼容性,兼容還原性試劑、變性劑、洗滌劑、以及其它添加物。適用于純化可溶性蛋白和包涵體蛋白。為了讓大家更多的了解Ni柱,這里給大家簡單介紹一下如何根據(jù)實(shí)際需求自己填裝Ni層析柱。
  
  操作方法:
  
  1、輕輕將鎳Ni柱懸浮在水中,沉降后沉積物體積要達(dá)到35ml。自然沉降,不要用磁力攪拌器以免打碎微球。
  
  2、將Ni樹脂轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中,用50ml純水洗滌四次,除去儲(chǔ)存液中的乙醇等物質(zhì),以純水保存至50ml總體積。
  
  3、用純水清洗空色譜柱,然后關(guān)閉出口閥門,保留1cm高的液面。
  
  4、通過玻璃三角漏斗將步驟2的樹脂泥漿倒入色譜柱中,用純水將柱子填滿。
  
  5、在柱子頂端安上接頭并將之與泵連接,以一定的流速13ml/min(或400cm/h)。不要超過規(guī)定的樹脂或柱子的使用壓力。
  
  6、保持流速,體積穩(wěn)定后再流3倍柱體積。標(biāo)記柱床高度。
  
  7、關(guān)閉流速,關(guān)掉鎳Ni柱的出口。斷開頂端接頭與泵,將頂端接頭移至標(biāo)記處,固定接頭。
  
  8、用1倍柱體積的0.1M硫酸鎳以5ml/min流經(jīng)柱子。
  
  9、用10倍柱體積的水以10ml/min洗掉未結(jié)合的Ni離子。
  
  10、如果柱子不馬上使用,用20%乙醇以10ml/min的流速洗滌四倍柱體積后保存。
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