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flag抗體A01868如何進(jìn)行鑒定,有哪些方法

點擊次數(shù):1208更新時間:2021-11-22
  flag抗體A01868是一段親水性八氨基酸短肽,其分子質(zhì)量約為1.0KDa??贵w可以通過基因重組技術(shù)添加到蛋白質(zhì)的N端或C端,由于flag抗體的尺寸小,親水性強,不會對蛋白表達(dá)、蛋白水解成熟、抗原性等造成影響。
  
  flag抗體A01868的鑒定:
  
  由蛋白濃度的測定公式求得蛋白濃度:A280nm×1.45-A260nm×0.74=蛋白濃度(mg/mL);單抗純化后,根據(jù)純化前后體積,推算出腹水中蛋白含量。
  
  單抗相對親和力測定:
  
  以合成的包被原400ng/孔包被酶標(biāo)板,按行分別加入按一定濃度倍比稀釋的純化單抗,37℃溫育30min,洗滌;加入酶標(biāo)二抗,37℃溫育30min,洗滌;加底物顯色20min,加終止液終止反應(yīng),雙波長掃描測定吸光值。
  
  以單抗?jié)舛葹闄M坐標(biāo),以所對應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)作圖,根據(jù)反應(yīng)曲線分析單克隆抗體的相對親和力。
  
  以抗體濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo),以所對應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)作圖,得一曲線,取曲線上OD值的50%所對應(yīng)的橫坐標(biāo)為該抗體的稀釋度,算出該抗體總的稀釋度后,計算親和常數(shù)。親和常數(shù)計算公式:親和常數(shù)K=160000(抗體分子量)/抗體稀釋度×抗體濃度(mg/ml)
  
  flag抗體A01868能夠特異性的與標(biāo)簽蛋白上的flag標(biāo)簽結(jié)合,能夠用于標(biāo)簽蛋白的純化、定性定量檢測蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞內(nèi)定位等實驗。
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